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冷冻切片常见问题及解决方法2:核模糊、细胞退变、皱褶条纹


      在冷冻切片的过程中,你是否也曾遇到以下问题:
      细胞核染色模糊、细胞组织退变、切片破碎不完整、切片卷曲皱褶,出现条纹帮皱......
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      专家们已获得解决这些问题的方法,让我们一起来看看他们是如何思考的吧。
冷冻切片冰晶问题可跳转:冷冻切片如何预防冰晶?

                                                       一、细胞核染色模糊,对比度差

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可能原因:

REASON

1.染色后梯度乙醇脱水不充分,切片带液体进入透明液,导致透明不彻底。肉眼观察云雾状。显微镜下组织结构模糊不清。

2.透明液的液面较低,没有达到切片梯度乙醇的高度,造成乙醇液体带入透明液中。



解决方法:

METHOD

切片组织在透明液中无水乙醇未脱干净,退回到无水乙醇,更换透明液,保证标准液面后重新透明。

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此外,手工操作染色后,镊会带有液体。封固时切片不要水平放置,放置镊带的液体渗入到组织,造成切片模糊。手持切片稍微上翘,可防止镊带的液体流入组织面而造成切片模糊不清。

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二、细胞组织退变

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可能原因:

REASON

1.有的医师愿意观察一张切片附两个厚薄不一样的切面,造成第一个切面延时固定,细胞退变。

2.还有的技师想观察一下切片质量,延误了迅速固定。特别在天气炎热,室温较高的环境下进行冷冻切片,延迟固定可导致细胞退变,影响染色及诊断。



解决方法:

METHOD

提倡一张玻片只放一个组织切面,冰冻切片完成后要立即放入固定液。如需观察切片质量,可待切片固定少许后再观察。



                                                         三、切片破碎不完整或不能切片



可能原因:

REASON

1.组织内含过多的脂肪或坏死组织。脂肪或坏死组织较一般组织块的切片温度要低些。冷冻速度慢,从而影响切片的完整性或延误报告时间。

2.组织块冷冻过度导致切片破碎或搓衣板状。



解决方法:

METHOD

冷冻切片组织除了要保持新鲜,还应注意避免组织内含有过多的脂肪(脂肪组织切片例外)及坏死组织。组织大小要适中,一般情况下,冷冻切片的大小约为1.5*1.5*0.3cm。卵巢肿瘤和脂肪瘤组织可少大一些。掌握好组织的冷冻时间,根据组织块的大小、性质、决定冷冻时间。一般认为组织块较大或脂肪组织,冷冻时间可适当长些,甲状腺组织、脑组织、淋巴结及动物组织等冷冻时间相对短些。每次冷冻切片操作完成后关闭好冷冻箱的盖子,保持冷冻箱温度恒定。



四、切片卷曲或皱褶

可能原因:

REASON

  1. 刀刃变钝。

  2. 防卷板粘有异物,和刀刃不平行



解决方法:

METHOD

注意检查道具,及时更换刀口,定期更换刀片。保持防卷板的清洁,每做一次冷冻切片,均应将刀口和防卷板擦拭干净,防止切片污染和切片皱缩。调整刀、防卷板的位置,保证两者平行,匀速切,且防卷板凸出于刀刃0.2mm。

四、切片上有条纹或帮皱


可能原因:

REASON

1.如果是垂直于刀片上的细条纹,可能是刀口有缺口

2.也可能是由于钙化组织、缝线引起;

3.如出现宽条纹或组织缺损,则可能是由于刀片黏附有组织残渣;

4.波浪线样的帮皱,可能是由于切片机内某个零件松动所致



解决方法:

METHOD

1.调整刀片、更换刀片

2.去掉刀片粘附的组织残渣

3.检查支撑刀片的刀架冷冻头等有无松动


      以上是小贝带来的冷冻切片常见问题分享。在平时的冷冻切片过程中,你遇到过哪些影响你切片的问题?欢迎在后台或学习群留言,我们的工程师将与你一起探讨。
参考文献 
《冷冻切片常见问题分析与预防》 骆新兰  1999 
《实用现代病理学技术》梁智勇 王德田 丁伟  2022

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